固有淋巴细胞（ILC）是相对较新发现的免疫细胞群，在对病原体的固有免疫应答、组织维持和感染后修复中起着重要的作用。根据细胞因子、转录因子和受体表达，ILC被分为三个亚群：ILC1，ILC2和ILC3，并且发现它们在功能上与T-helper 1（Th1）、Th2和Th17相似。然而，最近发现了一些具有中间表型的亚群，人们越来越认识到，之前这种ILC的分类可能被过度简化了。
被定义为谱系阴性（Lin-）CD127+ CRTH2+的人类ILC2仍然高度异质性，可以通过使用两个表面标记c-Kit和CCR6分为具有不同功能的亚群：
- c-Kit-群体（c-Kit- ILC2s）代表典型ILC2，表达更高水平的胸腺基质淋巴细胞生成素受体（TSLPR）和IL4、IL5和IL13 mRNA。这些细胞表现出对IL-33的强烈反应，产生细胞因子IL-5和IL-13。
- c-Kit + CCR6 +群体（c-Kit + ILC2s）代表非典型亚群，除了具有ILC2s的基本特征，还中等表达ILC3特征基因（例如编码转录因子RORγt的RORC），具备分化成IL-17的ILC3s的能力。
- 在c-Kit+ILC2中还有第三个亚群，就是表达皮肤归巢受体CCR10（CCR10+ ILC2s）的亚群，这个亚群似乎代表了皮肤ILC2s的前体，同时表现出类似ILC3的特征。
外周血CRTH2-c-Kit+ILC曾经被认为是ILC3，但是最近的研究表明这类细胞高度异质并且包含所有ILC人群的祖细胞。 最新研究表明，血液CRTH2-c-Kit+ILC中的NKp46+群体和KLRG1+群体分别代表偏向ILC3或ILC2的祖细胞。
Yoichiro Ohne等人为此设计了一个优化的流式方案，来区分这些亚群而无需担心不同亚群之间的交叉干扰，尤其是人类外周血中的ILC2内的亚群。
方案
设门
排除粘连体→排除死细胞→白细胞→淋巴细胞→排除T、单核、DC、B等系列→圈出CD94+NK和CD94-CD127+总ILC→总ILC根据CRTH2和c-Kit分为ILC1、ILC2、CRTH2-c-Kit+ILC（就是以前的ILC3），NK细胞根据CD56再分为高表达的弱表达的两个亚群，ILC2根据CCR10/c-Kit继续分为三个亚群。
CRTH2-c-Kit+ILC、ILC2三个亚群、NK细胞的NKp46、KLRG1表达。如前所述，CRTH2-c-Kit+ILC中的NKp46+群体和KLRG1+群体分别代表ILC3或ILC2的祖细胞。
更多的图片和方法细节，可参见在线附件：https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1002/cyto.a.24046
参考文献：Ohne Y. OMIP-066: Identification of Novel Subpopulations of Human Group 2 Innate Lymphoid Cells in Peripheral Blood [published online ahead of print, 2020 Jun 25]. Cytometry A. 2020;10.1002/cyto.a.24046. doi:10.1002/cyto.a.24046
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