光散射信号的强度高度取决于所分析颗粒的大小和折射率，所以对于诸如EV（细胞外囊泡）之类的亚微米级颗粒，绝大多数是小于500nm，流式细胞仪在光散射检测方面的缺点就变得显而易见。市场上的流式细胞仪采取了多种方法来改善亚微米级颗粒的检测，例如延长停留时间、应用高分辨率光学器件和不同的散射收集角度。但是，当我们分析病毒感染细胞产生的EV时，就会发现FSC信号的重要性，在这种情况下，可以基于不同的FSC大小来区分含病毒和不含病毒的EV，而不需要对病毒进行专门的染色。这一发现说明FSC信号包含了用于EV亚群分析有价值的信息。

    Ger JA Arkesteijn等人在5月27日Cytometryytometry杂志上提出了如下的FSC检测装置结构设计，同时8 mm的遮挡条和200μm的pinhole，可以非常有效地减少光学背景（红色就是背景干扰发出的光，即使从遮挡条外侧通过透镜，也会透射到pinhole的遮挡部分被排除掉），所以能够从FSC通道内的背景信号中可靠地分离出100 nm beads产生的FSC信号，甚至在测量beads和EV时都可以在FSC上进行阈值处理而不会受到大量背景信号的干扰。值得各位做流式细胞仪的厂家参考。
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    下图是检测100nm beads的实测图。以A、B图以荧光为阈值设置通道，E-G是以FSC为阈值设置通道。标准配置（5 mm遮挡条，700μm pinhole）、优化配置（8mm遮挡条，200μm pinhole）。
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    下面的密度图显示了PKH67标记M4T1分泌的EV的测量结果，对比了FSC检测器光学器件的标准配置（5mm遮挡条，700μm pinhole，A，C）和优化配置（8mm遮挡条， 200μm pinhole，B，D，E）。 A和B图处于荧光阈值模式。 C–E图处于FSC阈值模式。
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    Arkesteijn, G.J.A., Lozano‐Andrés, E., Libregts, S.F.W.M. and Wauben, M.H.M. (2020), Improved Flow Cytometric Light Scatter Detection of Submicron‐Sized Particles by Reduction of Optical Background Signals. Cytometry. doi:10.1002/cyto.a.24036