流式细胞仪CS&T报告怎么看？出问题了如何解决？

基于微球的质量评估系统是衡量流式细胞仪总体“健康”与否的金标准，因为微球上的荧光长时间可重现。 BD在2000年中期开发了一种较为常见的基于微球的系统：Cytometer设置和跟踪（CS＆T）微球。它们是用荧光染料混合物染色的聚苯乙烯微球，以不同的强度（bright/mid/dim）在所有通道中发出荧光。当与CS＆T软件（在FACSDiva内调用）搭配时，可轻松进行日常流式细胞仪仪器质控，自动监控仪器性能。这里肯定会有FLOWER问，我不是BD的机器，没有CS&T软件，怎么做仪器QA（Quality assurance）呢？在没有CS＆T软件的仪器上，可以使用其他标准微球，包括rainbow beads、8-Peak Beads等，具体步骤明天发。今天先谈CS&T。

跑CS&T很简单，启动CS&T软件之后，将一滴CS＆T微球稀释后上机，后面就交给软件了，详细内容参见：https://www.bdbiosciences.com/documents/webinar_2010_09_facsdiva.pdf

对于每个通道，软件将记录到的参数与参考值（即基准）进行比较。如果每日值落在建议的范围内，则性能将通过。如果这些值超出范围但仍在允许的范围内，则会出现警告。如果值超出容许范围，则性能控制将失败。

那么，每个指标是什么含义呢？

• PMTV：指的是PMT电压，根据CS&T算法计算得到，软件会计算要调整到相同的MFI，需要调整多少PMT电压，如果调整值ΔPMTV超过50V，那么就说明性能失控。
• Actual target value：微球每天的MFI值。
• %rCV: 指的是robust CV，是一种计算CV的替代方法，该CV对异常值的敏感性低于CV。 理想情况下，rCV应该在3左右。
• Optical Background (Br)：从光路收集的噪声。 背景噪声越多，Br越高。 因此，低的Br可提高分辨率。
• Detector efficiency (Qr)：指的是每个荧光分子检测到的光电子数。 Qr越高，分辨率越高。
• Laser delay：由于激光器在物理上是分开的，因此微球会在不同时间经过激光束，而来自单个事件的数据将被一起处理。 这些延迟取决于特定的鞘液压力。

有时，流式细胞仪的CS＆T性能控制会失败，表明需要关注流式细胞仪了，必要时寻求厂家工程师帮助。
在寻求帮助之前，先通过以下措施自行排查，必要时再叫工程师：
1、准备新批次的微球。 因为通不过QA有可能是原来的微球过期了、太稀了或已被光漂白了，并且不要忘记在使用前将微球充分混合，并始终以低速运行，确保单个微球逐一通过。
2、检测鞘液过滤器和管路中是否存在气泡。 如有必要，可以按照仪器指南清除气泡。
3、如果还是不行可以按下表，找到最常见的故障原因以及解决方法。 这张列表不一定很全，只能囊括一些最常见的原因。

信源：https://bitesizebio.com/46384/the-cst-report-its-troubles-and-how-to-fix-them/