流式细胞仪是研究免疫系统细胞组成的强大工具，即使在稀有细胞群体中，也能够确定细胞亚群的表型和功能。血液中免疫亚群的定量分析是临床上某些免疫和非免疫疾病的重要诊断和监测工具，包括但不限于干细胞移植、疫苗开发、癌症免疫疗法、遗传性免疫缺陷疾病、自身免疫疾病和监测艾滋病毒患者的CD4+T细胞。
流式细胞术的局限性在于缺乏全面的规范性数据，无法跟上我们对人类免疫细胞亚群的了解。基本淋巴细胞亚群的参考值在全球多个人群中都已经有不少，这些参考值为临床决策和总体免疫学研究提供了重要资源。但更详细的亚群，现有的数据样本量小、描述的样本群体不完整，以及所描述的免疫细胞群体的深度往往有限。由于样本量较小，这些健康对照中免疫系统变量的估计可能不准确，受“异常值”的影响很大，在许多情况下可能无法代表总体人群。这些问题的进一步加剧是实验室之间流式细胞术方法学缺乏标准化，例如使用不同的试剂、标记物和设门策略。这些因素增加了变异性，使实验室之间的结果对比更混乱，并且可能导致研究结果的可重复性差，最终限制了这种功能强大的工具对免疫系统进行研究的有效性。
为了克服这些局限性并推动该领域的发展，人类免疫学项目联合会（HIPC）在2012提出了从流式细胞术开始的免疫表型标准化方法[Maecker HT, McCoy JP, Nussenblatt R. Standardizing immunophenotyping for the Human Immunology Project. Nature reviews Immunology. 2012;12(3):191–200. pmid:22343568]。该项目提出了高度标准化的8色流式细胞术，用于鉴定T细胞、调节性T细胞（Treg）、B细胞和先天免疫细胞（树突状细胞，自然杀伤细胞[NK]和单核细胞）。
但是使用这些标准获得的免疫细胞亚群参考范围尚未公布。
Duke的Yi JS等人招募了137名健康人，覆盖不同年龄阶段，利用HIPC这个方案，并加上Tfh，建立了一套较为完整的参考范围。
分析和设门的逻辑如下：
上图的CD34实为CD38，杂志未校准正确。
最后的参考值，作者进行了总体、按年龄、按性别、按人种、按年龄&性别、按年龄&人种分别进行统计，目录如下（由于微信内不可点击），请复制网址到浏览器中查看（https://duke-hhis.github.io/reference-range/summary_stats.html），或点击阅读原文。
All Subjects
Summary for overall study population
Reference Intervals
By Age
By Sex
By Race
By Age & Sex
Females, 18-29
Females, 30-39
Females, 40-49
Females, 50-66
Males, 18-29
Males, 30-39
Males, 40-49
Males, 50-66
By Age & Race
Females, Caucasian
Females, Non-Caucasian
Males, Caucasian
Males, Non-Caucasian
信源：Yi JS, Rosa-Bray M, Staats J, Zakroysky P, Chan C, Russo MA, et al. (2019) Establishment of normative ranges of the healthy human immune system with comprehensive polychromatic flow cytometry profiling. PLoS ONE 14(12): e0225512. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0225512.
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