👼CAR-T细胞系统化培养方法

一、 简介

1.1 目的

完成CAR-T细胞的系统化培养

1.2 范围

适用于HD CD19 CAR-T细胞在一体化反应器上培养

1.3 名词定义、缩写

二、 材料

一体化培养箱、储液袋、废液袋、硅胶管、搅拌瓶、培养液、压缩空气、二氧化碳

三、 步骤方法

1.1 前准备

1.1.1 连接所有管路包括气体，确认液位探头、气体成分检测、搅拌、称重及四个蠕动泵能够正常运行。

1.1.2 进入关联界面

称重系统与过滤泵及废液泵关联；进液泵与液位电极关联。<br /> 

1.2 激活

1.2.1 进入参数设置界面。

设置搅拌速度为，检测频率为5s/次，温度为，温度检测频率为5s/次，通气量为，通气比例为，进液泵泵速设定为*， 开启液位电极，
1.2.2 从进样口打入细胞悬液，然后设定进液泵运行时间为，开启进液泵，泵入培养液。进液泵停止后，观察搅拌瓶中培养液是否达到所需体积。

1.2.3 回到主界面

确定温度、搅拌速度、通气量、通气比例达到设定值，细胞培养开始。

1.3 感染

1.3.1 取样口取样计数，调整密度为，计算需要泵出液/泵入液。
1.3.2 进入参数设置界面，设定过滤泵速为，废液泵速为，需称重量为。
1.3.3 开启过滤泵和废液泵，至称重量达到设定值，停止废液泵
1.3.4 如需要泵入培养液，计算出需泵入量，从进样口打入病毒和促感染液，后进入参数设置液面，设置进液泵泵速为，运转时间为，开始泵入液至所需量，进液泵停止。
1.3.5 设置过滤泵泵速为**，时间不限。
1.3.6 回到主界面，进入感染阶段。

1.4 补液

1.4.1 从取样口取样计数，计算需要补液体积。
1.4.2 进入参数设置界面，设定进液泵泵速和时间，开始运转至补液完成。
1.4.3 回到主界面，进入补液阶段。

1.5 换液

1.5.1 计算出需要置换出的培养液。进入参数设置界面，设定过滤泵和废液泵泵速为，设定称重重量为，开始运行过滤泵及废液泵。
1.5.2 达到废液设定重量后，关闭废液泵。开启过滤泵并取样计数，计算出需要泵入新鲜培养液体积。
1.5.3 设定进液泵泵速为，运转时间为，开始运转。达到所需新鲜培养液泵入量后，进液泵停止。
1.5.4 过滤泵泵速设定为**，时间不限。
1.5.5 回到主界面，进入换液阶段。
1.5.6 后期补液同1.4.

1.6 收集

1.6.1 进入参数设置界面，设定过滤泵和废液泵泵速为，称重重量为，开始收集废液。
1.6.2 达到称重重量后，停止废液泵，设定进液泵泵速为，时间为，开始泵入清洗液至所需体积。
1.6.3 重复1.6.1-1.6.2两到三次，至细胞液清洗置换完成。
1.6.4 设定成品泵泵速为，设置过滤泵为逆时针运转方向，泵速为，开始运行至所有细胞液收集完成。
1.6.5 关闭所有参数，拆卸培养系统。擦拭后开启紫外灭菌。

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